Dalam penentuan pembezaan enterobacteria dan beberapa vibrio, tindak balas Voges-Proskauer menduduki tempat yang istimewa. Ujian ini berdasarkan keupayaan bakteria untuk menapai glukosa untuk membentuk asetoin.
Intipati proses penyelidikan
Dalam mikrobiologi, tindak balas Voges-Proskauer sering digunakan untuk membezakan dalam keluarga Yersinia enterobacteria (termasuk patogen pseudotuberkulosis dan enterocolitis), Escherichia coli, dan aerobes pembentuk spora. Hasilnya divisualisasikan dengan mewarnakan medium apabila reagen tertentu ditambahkan.
Ujian ini tergolong dalam siri IMViC (singkatan daripada Indol, Methyl Red, Voges-Proskauer i Citrate) - sekumpulan ujian pengenalan termasuk definisi pembezaan:
- dengan indole, berdasarkan pecahan triptofan kepada indole, digunakan dengan kehadiran reagen Kovacs atau Ehrlich;
- menggunakanmethylroth, atau metil merah, yang mengesan pH tertentu akibat metabolisme glukosa;
- Tindak balas Voges-Proskauer untuk pengesanan asetil-metilkarbinol;
- penggunaan sitrat dengan perubahan warna akibat pengalkalian medium.
Intipati proses adalah visualisasi kehadiran bakteria yang didiagnosis disebabkan oleh interaksi asetoin yang dibentuk oleh mereka dengan potash kaustik dengan kehadiran oksigen. Acetyl-methylcarbinol dioksidakan kepada diacetyl, yang membentuk sebatian merah terang atau merah jambu. Tingkatkan sensitiviti ujian dengan memperkenalkan alpha-naphthol sebelum menambah potash kaustik.
Tetapan ujian
Perumusan tindak balas Voges-Proskauer melibatkan penanaman awal mikroorganisma. Budaya tulen disemai pada medium diagnostik pembezaan Clark, variasinya ialah sup Clark (tanpa penambahan agar-agar). Sama ada medium siap digunakan, atau disediakan secara bebas. Bahan-bahan termasuk:
- 5g peptone;
- 5g glukosa;
- 5g kalium fosfat dibasak;
- 1L sulingan.
Semasa kajian, kultur disuntik dengan gelung bakteriologi steril ke dalam medium cecair. Kuantiti - 5 ml dalam tabung uji ditambah kawalan. Pengeraman dijalankan pada suhu 35-37 darjah selama dua hari. Seterusnya, kajian tindak balas Voges-Proskauer dijalankan secara berperingkat:
- 2, 5 ml kultur sup dipindahkan ke tiub steril.
- Tambahkan enam titis alpha-naphthol (larutan alkohol 5%).
- Tambah 40%larutan kalium kaustik dalam jumlah 0.1 ml, atau dua titik.
- Kacauan dilakukan dengan menggoncang tabung uji perlahan-lahan.
- Nilai keputusan selepas 15 minit dari permulaan percubaan.
Kaedah ujian alternatif ialah pengeraman semalaman, yang masanya dikurangkan kepada 18 jam atau sehingga sehari. Sebagai tambahan kepada kaedah ini, ujian ekspres juga digunakan: budaya dimasukkan dalam gelung ke dalam 2 ml medium, diinkubasi selama kira-kira empat jam, kemudian reagen ditambah dalam jumlah yang sama 2-3 titis, dicampur dan keputusan dinilai selepas sepuluh minit.
Kawalan adalah salah satu agen penyebab pneumonia Klebsiella pneumoniae - strain atcc 13883.
Penilaian keputusan
Selepas masa yang diperlukan selepas menambah reagen (dari 5 hingga 15 minit), warna merah ceri harus diperhatikan dengan tindak balas positif yang ketara, merah dan merah jambu - dengan tindak balas positif yang lemah. Tiada perubahan direkodkan sebagai hasil negatif.
Lebihan potash kaustik dalam larutan boleh memberikan tiruan tindak balas positif, pewarnaan dalam warna tembaga. Dalam kes ini, tindak balas negatif koloni yang diuji harus direkodkan. Selain itu, pewarnaan tembaga muncul dalam kes di mana penilaian diberikan sejam selepas pengenalan reagen.
Semasa menilai keputusan, ia mesti diambil kira bahawa penanaman berpanjangan mikroorganisma yang dikaji (lebih daripada tiga hari) membawa kepada pengasidan medium, yang boleh membawa kepada hasil kajian yang salah. Tindak balas mungkin agak positif ataunegatif palsu.
Keperluan untuk reagen ujian
Reagen Voges-Proskauer mesti memenuhi keperluan seperti kepekatan yang betul, ketulenan tinggi dan kestabilan, yang dicapai melalui penyimpanan yang betul.
Kit ujian sedia untuk digunakan biasanya mengandungi reagen untuk 100 atau lebih kegunaan dan terdapat dalam botol plastik atau kaca berwarna. Kualiti dikawal oleh dokumentasi yang berkaitan.
