Pelbagai jangkitan bakteria memerlukan pengenalan yang jelas tentang patogen dan definisi spesiesnya. Untuk menentukan jenis mikroorganisma, ahli mikrobiologi dibantu oleh sifat tinctorialnya - kerentanan mikrob terhadap pewarnaan dengan pelbagai pewarna. Kaedah ini membolehkan anda meneroka morfologi patogen. Sifat tinctorial bakteria adalah sangat penting untuk penyelidikan praktikal dan teori dalam bidang mikrobiologi.
Penyelidikan mikrob
Dalam bakteriologi, terdapat banyak kaedah untuk mengotorkan mikroorganisma. Kesemuanya adalah berdasarkan sifat tinctorial bakteria. Pewarnaan membolehkan anda menentukan bentuk, struktur, saiz, kedudukan relatifnya. Ini membolehkan menyelesaikan masalah mensistematikkan jenis mikroorganisma biologi am dan mikrobiologi perbandingan.
Mengapa melukisnya
Bakteria boleh dikatakanorganisma lutsinar, dan tanpa menggunakan pewarnaan, mereka kurang kelihatan untuk mikroskop konvensional. Anda boleh menggunakan jenis mikroskop khas (kontras fasa, medan gelap) untuk mengkaji objek, tetapi cara paling mudah ialah mengotorkan, selepas itu bakteria kelihatan dalam mikroskop cahaya konvensional.
Penyediaan sampel
Tidak kira teknik pewarnaan yang digunakan, terdapat peraturan seragam untuk menyediakan objek yang sedang dikaji. Peringkat berikut adalah wajib:
- Alat steril membuat sapuan pada slaid kaca.
- Sampel sedang dikeringkan. Ini dilakukan pada suhu bilik atau menggunakan kabinet pengeringan.
- Diikuti dengan peringkat penetapan - mikroorganisma melekat pada kaca dengan sebatian khas.
- Pewarnaan yang betul - sampel ditutup dengan pewarna untuk tempoh masa yang tetap, selepas itu ia dicuci.
- Pengeringan akhir - sampel dikeringkan semula.
Pewarna yang paling biasa
Pewarna yang paling biasa digunakan adalah berasaskan aniline dengan nilai asid (pH) yang berbeza. Kebanyakan pewarna adalah serbuk yang dicairkan dalam alkohol.
Pewarna di mana kation merupakan agen pewarna dipanggil asas (pH lebih daripada 7). Ia boleh digunakan untuk mengotorkan mikroorganisma dengan warna merah (magenta, safranin), ungu (metil violet, tionin), biru (metilena biru), hijau (hijau malachite), coklat (chrysoidin) dan hitam (indulin).
Pewarna, di mana agen pewarna adalah anion, dipanggil berasid (pH kurang daripada 7). Mereka akan mengotorkan sampel merah (eosin), kuning (pikrin) atau hitam (nigrosin).
Terdapat sekumpulan pewarna neutral (contohnya, rhodamine B), di mana kedua-dua kation dan anion bertindak sebagai agen pewarna.
Budaya mati atau hidup
Kaedah pewarnaan dibahagikan kepada dua kumpulan mengikut bentuk hayat spesimen ujian.
- Pewarnaan penting (seumur hidup). Kaedah mengkaji sifat mikroorganisma ini digunakan dalam kajian tisu hidup, yang memungkinkan untuk memerhatikan proses penting mikrob. Untuk pewarnaan ini, pewarna dengan ketoksikan rendah dan kuasa penembusan yang tinggi digunakan.
- Pewarnaan post-vital. Ini adalah pewarnaan mikroorganisma mati atau mati. Terima kasih kepada sifat tinctorial bakteria, ahli mikrobiologi menentukan strukturnya. Pewarnaan inilah yang paling banyak digunakan.
Gram-positif dan Gram-negatif
Ciri-ciri bakteria inilah yang boleh didapati dalam arahan untuk pelbagai ubat. Kaedah mengkaji sifat tinctorial bakteria ini adalah berdasarkan penggunaan pewarna violet gentian dan penetapan iodin. Ini adalah teknik Hans Christian Gram, seorang doktor Denmark yang mencadangkannya pada tahun 1884. Hasil daripada pewarnaan ini, bakteria dibahagikan kepada dua kumpulan:
- Gram (+) - bertukar menjadi biru(staphylococci dan streptokokus).
- Gram (-) - warnakan merah jambu kepada merah (enterobacteria, salmonella, E. coli).
Hasil pewarnaan yang berbeza adalah disebabkan oleh sifat pewarnaan dinding bakteria yang berbeza. Kaedah pewarnaan Gram masih menjadi kaedah utama dalam diagnosis beberapa penyakit berjangkit.
Teknik pewarnaan lain
Mari kita cirikan beberapa lagi kaedah yang digunakan secara meluas dalam bakteriologi.
- Kaedah Ziehl-Nelson - menentukan rintangan asid bakteria. Ia mengenal pasti agen penyebab tuberkulosis dan mikobakteriosis.
- Teknik Romanovsky-Giemsa - mengotorkan bakteria asidofilik (asid asetik dan asid laktik) merah, dan biru basofilik (spirochetes dan protozoa).
- Teknik Morozov - mengotorkan bakteria coklat dan menjadikan flagelanya kelihatan.
Spora boleh dilihat
Pewarnaan fuchcin Tsiel membolehkan anda melihat spora bakteria. Mempunyai warna merah jambu selepas pewarnaan, mereka jelas kelihatan dengan latar belakang bakteria biru. Kaedah ini juga merupakan alat bakteriologi dan mempunyai kepentingan praktikal yang besar.
